Sản xuất kháng thể kháng dại gắn huỳnh quang

Phản ứng miễn dịch huỳnh quang là kỹ thuật vàng trong giám sát phòng thí nghiệm bệnh dại, hơn nữa còn có ứng dụng khá rộng rãi trong nghiên cứu virus dại và kiểm định các công đoạn trong quá trình nghiên cứu, sản xuất vaccine dại. Trên thế giới đã có kháng thể đa dòng, đơn dòng kháng virus dại gắn huỳnh quang (FITC) thương mại hóa của hãng Biorad. Sinh phẩm của hãng Biorad có giá thành cao, hơn nữa sinh phẩm lại không luôn sẵn có trong nước và phụ thuộc rất nhiều vào các nhà nhập khẩu. Chính vì vậy việc chủ động sản xuất sinh phẩm trong nước là điều cần thiết, phục vụ cho nghiên cứu, chẩn đoán bệnh dại cũng như trong nghiên cứu sản xuất vac- cine dại thế hệ mới. Đề tài được thực hiện với các mục tiêu:

1. Nghiên cứu sản xuất cộng hợp kháng thể kháng dại gắn huỳnh quang.

2. Ứng dụng cộng hợp sản xuất thử nghiệm để chuẩn độ hiệu giá virus dại.

II. VẬT  LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

1. Vật liệu nghiên cứu

IgG chuột kháng virus dại (10mg/ml) đã được tinh chế do Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương (VSDTTƯ) sản xuất; Virus vaccine tam liên sởi, quai  bị,  rubella  (SMD);  chủng  virus  CVS  - Chalenge Virus Strain; tế bào BHK 21 (Pháp); Kháng thể đơn dòng kháng nucleoprotein của vi- rus dại gắn huỳnh quang (Biorad); 116 loạt virus dại Vnukovo - 32 (VSDTTƯ); Các dụng cụ, thiết bị thực hiện các kỹ thuật hoá sinh, miễn dịch

 

Kháng thể kháng dại gắn huỳnh quang có ứng dụng rộng rãi trong chẩn đoán và nghiên cứu virus dại, do vậy việc nghiên cứu sản xuất để đáp ứng nhu cầu sử dụng ở trong nước là hết sức cần thiết. Mục tiêu: nghiên cứu sản xuất cộng hợp kháng thể kháng dại gắn huỳnh quang (FITC); Ứng dụng cộng hợp sản xuất thử nghiệm để chuẩn độ hiệu giá virus dại. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: cộng hợp được chế tạo theo phương pháp của Ed Harlow, David Lane 1998, sử dụng nền tế bào và các virus sởi, quai bị, rubella, virus dại để đánh giá chất lượng của cộng hợp. Phương pháp chuẩn độ hiệu giá virus dại trên chuột được sử dụng để đánh giá hiệu quả của cộng hợp trong việc chuẩn độ hiệu giá virus dại trên tế bào thông qua test – T và Leven. Kết quả: cộng hợp sản xuất thử nghiệm có hiệu giá 1/80, ổn định ở 40C trong 30 tháng, đặc hiệu với virus dại và không có FITC dư thừa; hiệu giá của 116 loạt virus dại chuẩn độ bằng phương pháp trên tế bào sử dụng cộng hợp sản xuất thử nghiệm cho kết quả tương đương với chuẩn độ hiệu giá trên chuột với p > 0,05.